Bộ phim Hiệp Sĩ Chuột xoay quanh chú chuột bé nhỏ tên là Despereaux, sinh ra trong thời điểm vương quốc Dor u ám trong màn đêm tăm tối của hắc ám, tuy nhỏ bé, nhưng dũng cảm và lòng quyết tâm, Despereaux đã tự mình dấn thân vào một cuộc phiêu lưu vô cùng gian khó nhằm giải thoát cho nhà vua và đem lại ánh sáng cho vương quốc Dor của mình